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基于淫羊藿次苷ⅱ单克隆抗体的elisa检测方法的建立

Establishment of enzyme-linked immunosorbent assay method based on monoclonal antibody against IcarisideⅡ

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单位: [1]首都医科大学附属北京友谊医院泌尿外科,北京,100050 [2]北京大学第一医院男科中心,北京,100034 [3]长春中医药大学附属医院泌尿外科,长春,130021
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关键词: 淫羊藿次苷Ⅱ 单克隆抗体 酶联免疫吸附测定法

摘要:
目的建立一种检测生物样品中淫羊藿次苷Ⅱ的间接竞争酶联免疫分析方法(icELISA)。方法制备淫羊藿次苷Ⅱ免疫抗原,免疫6~8周龄雌性BALB/c小鼠,建立并筛选稳定分泌淫羊藿次苷Ⅱ单克隆抗体(mAb6A9)的杂交瘤细胞株,用此细胞通过小鼠体内诱生腹水的方法制备抗体;利用mAb6A9建立检测淫羊藿次苷Ⅱ的icELISA方法,并借助超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)检验其可靠性。结果当血清淫羊藿次苷Ⅱ浓度为4.6~50.2 ng·mL-1时,icELISA法吸光度与浓度呈良好的线性关系(Y=-1.256 9X + 3.488 8,R2=0.993),IC50为15.2 ng·mL-1,回收率为86.3%~103.8%。对淫羊藿次苷Ⅱ的血药浓度进行动态检测,结果表明icELISA与UPLC-MS/MS方法具有良好的相关性(R2=0.998),检测结果无显著性差异。结论本研究建立了一种可用于检测血清中淫羊藿次苷Ⅱ的icELISA方法,该方法简便、灵敏,有望用于生物样品中淫羊藿次苷Ⅱ的快速检验。

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第一作者:
第一作者单位: [1]首都医科大学附属北京友谊医院泌尿外科,北京,100050
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