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鲍曼不动杆菌外膜蛋白34的表达纯化及其生物活性分析

Expression and Purification of Outer Membrane Protein 34 of Acinetobacter baumannii and Analysis of Its Bioactivity

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资源类型:

收录情况: ◇ 统计源期刊 ◇ 北大核心 ◇ CSCD-E

单位: [1]首都医科大学附属北京友谊医院临床检验中心,北京,100050
出处:
ISSN:

关键词: 鲍曼不动杆菌 外膜蛋白34 包涵体 圆二色谱 凋亡

摘要:
通过基因克隆方法制备鲍曼不动杆菌ATCC 19606(Acinetobacter baumannii ATCC 19606)外膜蛋白34(Outer membrance protein 34,Omp34),并分析其生物结构及对HEK293细胞的凋亡作用。采用PCR方法扩增鲍曼不动杆菌ATCC19606Omp34基因,并将其克隆到表达载体p ET28a(+)以构建重组质粒pET28a(+)-Omp34,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导蛋白表达并用镍柱亲和层析纯化蛋白,使用L-精氨酸和还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)可使Omp34蛋白正确复性,生物信息预测Omp34生物结构,利用圆二色谱(Circular dichroism CD)技术测定Omp34的二级结构,通过流式细胞术和Western blot检测Omp34对HEK293细胞的凋亡作用。成功构建表达载体p ET28a(+)-Omp34,并在原核表达体系中高效表达,通过复性得到可溶蛋白。生物信息预测Omp34为β桶状蛋白,圆二色谱证实Omp34结构为β折叠结构,其中α-螺旋含量为12%、β-折叠为39%、β-转角为22%、无规则卷曲为27%。复性的Omp34可使HEK293细胞发生凋亡。通过分子克隆技术成功获得了鲍曼不动杆菌外膜蛋白34,并解析出其二级结构,证实其可以导致HEK293细胞凋亡,这为将来进一步研究鲍曼不动杆菌外膜蛋白34的生物学功能及其耐药机制奠定了基础。

语种:
第一作者:
第一作者单位: [1]首都医科大学附属北京友谊医院临床检验中心,北京,100050
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