资源类型：
期刊
Pubmed体系：
Comparative Study;English Abstract;Journal Article;Research Support, Non-U.S. Gov't
收录情况：
◇ 北大核心
◇ 中华系列
文章类型：
论著
单位：
[1]100050,北京,首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心
临床科室
国家中心肝病分中心
首都医科大学附属北京友谊医院
出处：
中华肝脏病杂志.2006,14(10):742-747.
ISSN：
1007-3418
关键词：
金属蛋白酶组织抑制因子-1
RNA
反义
小干扰RNA
腺相关病毒
肝星状细胞
摘要：
目的 观察以腺相关病毒(AAV)为载体,含有针对大鼠金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1的反义RNA及小干扰RNA(siRNA)的重组AAV(rAAV/ANTI-TIMP-1/neo及rAAV/siRNA-TIMP-1/neo)感染大鼠肝星状细胞系HSC-T6后,TIMP-1表达的受抑制情况.方法 经聚合酶链反应(PCR)扩增及酶切后连接,将针对TIMP-1的反义RNA片段及siRNA片段分别构建于AAV载体中并测序鉴定,将其包装成重组病毒后感染大鼠肝星状细胞系HSCT6,同时设空白对照组.经G418以400 μg/ml的浓度筛选30d后,分别应用荧光定量PCR技术及Western blot检测重组病毒感染组及空白对照组HSC-T6 TIMP-1的基因转录及蛋白质表达水平.结果 经PCR、酶切及序列测定证实,两种重组AAV载体质粒(pdl6-95/ANTI-TIMP-1/neo和pdl6-95/siRNA-TIMP-1/neo)克隆成功.将重组质粒包装成病毒感染HSC-T6细胞30 d后,通过荧光定量PCR技术及Western blot分析显示,重组病毒rAAV/siRNA-TIMP-1/neo组与对照组细胞相比,HSC-T6中的TIMP-1基因的转录被抑制(P＜0.01),且表达水平与对照组相比约下降60%;而rAAV/ANTI-TIMP-1/neo组及空载体组与对照组相比TIMP-1基因的转录及表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 通过AAV载体技术重组病毒rAAV/siRNA-TIMP-1/neo可有效地抑制TIMP-1基因的表达,而针对TIMP-1基因全长的重组病毒rAAV/ANTI-TIMP-1/neo对体外培养的HSC-T6细胞TIMP-1基因的转录与表达无明显抑制作用.
基金：
中国国家自科基金委(30500425);北京市自然科学基金(7053066)
PubmedID：
17064467
第一作者：
丛敏
第一作者单位：
[1]100050,北京,首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心
推荐引用方式(GB/T 7714)：
丛敏,王萍,刘天会,等.反义及小干扰RNA对大鼠肝星状细胞金属蛋白酶组织抑制因子-1表达的抑制作用[J].中华肝脏病杂志.2006,14(10):742-747.
