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◇ 统计源期刊
文章类型：
单位：
[1]首都医科大学附属北京友谊医院皮肤性病科
临床科室
皮肤性病科
皮肤性病科
首都医科大学附属北京友谊医院
[2]天津医科大学朱宪彝纪念医院天津市内分泌研究所
[3]天津医科大学总医院皮肤性病科
出处：
ISSN：
关键词：
鼠肺炎沙眼衣原体
Pgp3
基因表达
结构域
摘要：
目的获得鼠肺炎沙眼衣原体（CM）质粒编码蛋白Pgp3氨基端（n）、羧基端（c）和中间段（m）分别删除的蛋白Pgp3Δn、Pgp3Δm和Pgp3Δc,为近一步研究其功能及沙眼衣原体（C. t）致病机制提供基础。方法用聚合酶链式反应（PCR）扩增目的基因Pgp3Δn、Pgp3Δm和Pgp3Δc,分别将其定向插入原核表达载体PET-30a（+）中,连接产物转化入大肠埃希菌DH5α、涂板、挑取单克隆提取质粒进行酶切、测序鉴定。鉴定正确的重组质粒分别转化入大肠埃希菌BL21,15℃诱导表达16 h和37℃诱导表达4 h,考马斯亮蓝染色和蛋白质印迹法鉴定目的蛋白。结果 PCR扩增的目的基因Pgp3Δn、Pgp3Δm和Pgp3Δc的长度分别为597、525、324 bp,Nde I和HindⅢ双酶切重组质粒后电泳显示酶切片段大小符合预期,测序结果显示插入片段序列均与基因库中一致;考马斯亮蓝染色和蛋白质印迹显示目的蛋白分子量分别约为22 000、18 700和12 000,3个蛋白片段均在15℃诱导表达16 h的条件下表达量更多。结论成功表达Pgp3Δn-His、Pgp3Δm-His和Pgp3Δc-His融合蛋白,为进一步研究Pgp3的功能位点和作用机制奠定基础。
基金：
国家自然科学基金资助项目（编号:31570178）；;天津市自然科学基金资助项目（编号:16JCQNJC11100）；
第一作者：
第一作者单位：
[1]首都医科大学附属北京友谊医院皮肤性病科
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
徐宏俊,孙毅娜,刘全忠,等.鼠肺炎沙眼衣原体毒力因子pgp3蛋白的分段克隆表达[J].临床和实验医学杂志.2021,20(8):785-788.
