资源类型：
申请号：
申请日期：
授权年份：
公开号：
公开日：
法律状态：
主分类号：
摘要：
本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种细胞毒性T细胞脱颗粒的流式细胞术检测方法，包括：通过抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用激发细胞毒性T细胞脱颗粒，再用流式细胞术检测激发后与激发前细胞毒性T细胞中囊泡膜蛋白标志物CD107a的平均荧光强度的比值来评价细胞毒性T细胞的脱颗粒功能，若比值≥2.8提示脱颗粒功能正常。本申请提供的细胞毒性T细胞脱颗粒的流式细胞术检测方法，检测快速，通量大，准确度高，且人为因素影响较小。通过对天然刺激物的选择、效靶细胞配比及孵育时间等关键技术细节进行优选限定，建立了稳定规范的技术流程。
主权项：
一种细胞毒性T细胞脱颗粒的流式细胞术检测方法，其特征在于，包括：通过抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用激发细胞毒性T细胞脱颗粒，再用流式细胞术检测激发后与激发前细胞毒性T细胞中囊泡膜蛋白标志物CD107a的平均荧光强度的比值来评价细胞毒性T细胞的脱颗粒功能，若比值≥2.8提示脱颗粒功能正常；所述的检测方法具体包括以下步骤：1)、分离待检样本中的外周血单个核细胞及并计数调整细胞浓度至1.8～2.2×10 6 /ml；2)、取P815细胞并计数调整细胞浓度至1.8～2.2×10 6 /ml；3)、将步骤1)中的所述外周血单个核细胞和步骤2)中的所述P815细胞按体积比等比混合后平均分成两组，向其中一组中加入抗人CD3抗体作为实验组，另一组作为对照组；将两组于37℃，5％CO 2 培养箱中共孵育2.5～3.5h后离心并弃上清，得到沉淀；抗人CD3抗体的浓度为0.25～0.5μg/100μl；4)、加入流式染色缓冲液重悬步骤3)中所述沉淀，同时加入抗CD3、CD8、CD107a的流式抗体并孵育；在步骤4)中，CD3、CD8的抗体的浓度为0.45～1.0μg/100μl；CD107a的抗体浓度为0.06～0.125μg/100μl；5)、待孵育完成后离心，用流式染色缓冲液洗涤沉淀；6)、洗涤后用流式染色缓冲液重悬混匀细胞并用流式细胞仪进行检测；7)、统计CD3+CD8+的细胞中CD107a的平均荧光强度，并计算实验组与对照组的平均荧光强度的比值用以评价细胞毒性T细胞的脱颗粒功能，若比值≥2.8提示脱颗粒功能正常。
事务数据：
7、2020.04.03 专利申请权、专利权的转移 专利权的转移
IPC(主分类):G01N 15/14
登记生效日:20200316
变更事项:专利权人
变更前权利人:广州金倍来生物科技有限公司
变更后权利人:北京倍科为生物技术有限公司
变更事项:地址
变更前权利人:510000 广东省广州市黄埔区国际生物岛螺旋三路10号706房
变更后权利人:100000 北京市通州区榆景东路5号院55号楼1层101室406号
6、2019.12.20 专利申请权、专利权的转移 专利权的转移
IPC(主分类):G01N 15/14
登记生效日:20191203
变更事项:专利权人
变更前权利人:北京金域医学检验实验室有限公司
变更后权利人:广州金倍来生物科技有限公司
变更事项:地址
变更前权利人:101109 北京市朝阳区京顺东街6号院26号楼1层101、2层201、3层301、4层401
变更后权利人:510000 广东省广州市黄埔区国际生物岛螺旋三路10号706房
5、2018.11.27 专利申请权、专利权的转移 专利权的转移
IPC(主分类):G01N 15/14
登记生效日:20181108
变更事项:专利权人
变更前权利人:首都医科大学附属北京友谊医院
变更后权利人:北京金域医学检验实验室有限公司
变更事项:地址
变更前权利人:100000 北京市西城区永安路95号
变更后权利人:101109 北京市朝阳区京顺东街6号院26号楼1层101、2层201、3层301、4层401
4、2018.05.01 授权 授权
3、2017.08.29 专利申请权、专利权的转移 专利申请权的转移
IPC(主分类):G01N 15/14
登记生效日:20170809
变更事项:申请人
变更前权利人:王昭
变更后权利人:首都医科大学附属北京友谊医院
变更事项:地址
变更前权利人:100000 北京市西城区永安路95号
变更后权利人:100000 北京市西城区永安路95号
2、2016.06.01 实质审查的生效 实质审查的生效
IPC(主分类):G01N 15/14
申请日:20160108
1、2016.05.04 公开 公开
