资源类型：
申请人：
首都医科大学附属北京友谊医院
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中国食品药品检定研究院
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当前专利权人：
首都医科大学附属北京友谊医院
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中国食品药品检定研究院
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申请号：
申请日期：
公开号：
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法律状态：
摘要：
本发明公开了一种ATP7B基因敲除小鼠模型的构建方法。利用CRISPR‑Cas9基因敲除技术，敲除ATP7B基因第2外显子。ATP7B基因敲除后的小鼠均表现为明显的肝脏铜离子淤积等人WD患者临床表现。本发明构建的模拟人WD疾病的小鼠模型，该模型稳定性强且遗传稳定，与人类WD疾病表现类似，可为进一步研究WD发病机制以及基因治疗提供经济、简单、可靠的动物模型。
主权项：
1.ATP7B基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1)基于CRISPR-Cas9系统设计靶向ATP7B基因的sgRNA；2)sgRNA与Cas9核酸酶的mRNA经体外转录后，一起注射到小鼠受精卵中，然后将受精卵移植到假孕母鼠体内，产出F0代，对F0代进行PCR鉴定，将得到的阳性F0代与野生型小鼠交配获得F1代杂合子，F1代杂合子进行自交进一步筛选获得ATP7B基因敲除的纯合子代，最终将纯合子作为ATP7B基因敲除小鼠模型；其中，sgRNA作用位点位于ATP7B基因的2号外显子上，sgRNA作用位点的DNA序列为：5’-CAAGATCCGGAAACTGCAAG-3’和5’-GCATGCCGTCTATTCTTAGT-3’。
