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收录情况：
◇ 统计源期刊
◇ 北大核心
◇ CSCD-C
文章类型：
单位：
[1] 北京师范大学细胞增殖及调控生物学教育部重点实验室
[2] 首都医科大学附属北京友谊医院北京热带医学研究所
医技科室
北京热带医学研究所
北京热带医学研究所
首都医科大学附属北京友谊医院
出处：
ISSN：
关键词：
PHP14
HSP90
原核表达和纯化
体外相互作用
摘要：
目的:表达和纯化人组氨酸磷酸酶PHP14蛋白,并寻找与其存在体外相互作用的蛋白。方法:PCR扩增PHP14的全长cDNA,并将其克隆至pGEX4T原核表达载体,构建重组表达质粒。用重组表达质粒转化大肠杆菌BL21菌株,经IPTG诱导后,使用Glutathione Sepharose 4B凝胶颗粒进行亲和纯化,通过SDS-PAGE电泳确定融合蛋白的表达。进行GST-Pulldown实验,寻找体外与PHP14相互作用的蛋白,并进行质谱鉴定。结果:在大肠杆菌BL21中成功了表达出了PHP14的可溶性融合蛋白;经Glutathione Sepharose4B凝胶颗粒纯化后,获得了纯化的GST-PHP14融合蛋白,GST-Pulldown实验和质谱鉴定结果发现PHP14与HSP90在体外存在相互作用。结论:实现了PHP14的原核表达和纯化,发现PHP14与HSP90在体外可能存在相互作用。
基金：
国家“973”计划（2006CB910100）；;北京市自然科学基金（7051002）；;北京市科学技术委员会基金（Y0204002040111）资助项目；
第一作者：
第一作者单位：
[1] 北京师范大学细胞增殖及调控生物学教育部重点实验室
[2] 首都医科大学附属北京友谊医院北京热带医学研究所
推荐引用方式(GB/T 7714)：
徐安健,蒋单懿,黄凌云,等.人组氨酸磷酸酶php14的原核表达及其体外互作蛋白的研究[J].中国生物工程杂志.2010,30(7):7-11.
