目的将人类多能干细胞 （hPSCs）进行基因编辑和分化是干细胞治疗的发展趋势。所以在无异源 （Xeno-free）的培养条件下,系统地比较研究非病毒的干细胞转染方法有助于临床科研的发展。方法采用E8和Vitronectin人类干细胞Xeno-free培养系统培养人类H1干细胞系,从细胞活力、干细胞分化标记和转染效率三个方面比较并优化了3种主流的非病毒转染方法,分为空白对照组 （正常培养的H1,未做任何处理）、转染GFP荧光质粒的电转组、脂质体组和磷酸钙组。多组间比较采用单因素方差分析和Tukey多重比较。结果 3种转染方法对H1细胞的分化都没有显著的影响,转染后各组99.4﹪以上的细胞分型为SSEA1-TRA-1-60+。从形态上观察,磷酸钙转染对干细胞损伤严重;电转和脂质体转染对细胞的损伤较小,且可以在Xeno-free培养系统下对干细胞形成有效转染。转染效率方面:优化前,与对照组、电转组、磷酸钙组的GFP阳性细胞率[（0.46±0.10）﹪、（0.06±0.10）﹪、（0.14±0.24）﹪]相比,脂质体组的转染效率 （7.99±0.47）﹪最高 （P均( 0.01）。优化试剂浓度和程序后,电转组的转染效率升高到 （65.47±3.07）﹪,比优化后的脂质体组和磷酸钙组的效率都要高[（14.7±0.26）﹪和（4.84±0.25）﹪],差异有统计学意义（P ( 0.01）。结论电转和脂质体转染适用于Xeno-free培养系统下人类多能干细胞系H1的转染,优化后利用电转程序A13转染H1细胞可以获得本实验中最高的转染效率。