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钩端螺旋体聚beta羟基丁酸(phb)生物合成途径分析

Pathway analysis of the leptospiral polyhydroxybutyrate(PHB) synthesis

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资源类型:

收录情况: ◇ 统计源期刊 ◇ 北大核心 ◇ CSCD-C

单位: [1] 首都医科大学附属北京友谊医院北京热带医学研究所 [2] 热带病防治研究北京市重点实验室
出处:
ISSN:

关键词: 钩端螺旋体 聚Beta羟基丁酸(PHB) 生物途径分析 抗逆能力

摘要:
【目的】致病型问号钩端螺旋体(问号钩体,Leptospira interrogans)和腐生型双曲钩体(L.biflexa)能够大量合成菌体内贮藏物,这可能是钩体在营养贫瘠环境中长时间存活的主要原因之一。本研究对钩体聚Beta羟基丁酸(PHB)贮藏物进行定性定量测定,通过基因组分析补充定义PHB合成主要功能基因,并采用分子生物学方法初步证明PHB合成途径的完整性,为进一步研究PHB合成与钩体抗逆能力的关系奠定基础。【方法】采用脂类特异性尼罗红染色法和浓硫酸氧化-紫外分光光度计测定法,对问号钩体和双曲钩体的PHB贮藏物进行定性定量测定;采用生物信息学方法(BLAST和InterProscan/InterPro2Go),通过同源性分析和功能结构域搜索寻找钩体基因组中的PHB合成相关基因;最后采用克隆测序和定量RT-PCR技术检测相关基因表达情况,初步验证生物信息学预测结果。【结果】尼罗红染色和氧化后比色定量实验证明钩体合成细菌常见贮藏物PHB,问号钩体合成量为菌体干重的42%45%,双曲钩体合成量为64%68%。尽管已公布的多个钩体基因组中均没有定义完整的PHB合成途径,但本研究通过综合生物信息学分析,在问号钩体和双曲钩体中鉴定了PHB合成途径的主要功能基因(phbC)。克隆测序和定量RT-PCR证实钩体转录表达大部分PHB合成相关基因(phbA/B/C),说明钩体内该生物途径基本完整,且部分高水平表达基因可能是钩体主要的PHB合成相关基因。【结论】问号钩体和双曲钩体均可合成PHB贮藏物,且具有基本完整的PHB合成生物途径。

基金:
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第一作者:
第一作者单位: [1] 首都医科大学附属北京友谊医院北京热带医学研究所 [2] 热带病防治研究北京市重点实验室
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