目的利用实时定量PCR技术（SYBR Green染料法）建立一种快速、特异、敏感、经济、准确检测肺炎支原体的方法,并评价其在临床上的应用价值。方法选择肺炎支原体的23S rRNA耐药相关基因作为扩增区,设计特异性引物,然后提取相应质粒作为标准品,建立绝对定量的标准曲线。比较荧光定量PCR方法与传统巢式PCR方法和市售试剂盒的特异度和灵敏度;分别利用上述三种方法和培养法检测临床咽拭子样本,进行相关系数、符合率及kappa系数的分析。结果实时定量PCR和巢式PCR检测肺炎支原体的灵敏度为10拷贝;市售试剂盒为102拷贝。特异性检验中,肺炎支原体样本检测为阳性,人型支原体和其他4种细菌均检测为阴性。临床样本检测中,实时定量PCR、巢式PCR、市售试剂盒和培养法的阳性率分别为55.49%、52.75%、47.25%和39.01%。统计学分析结果显示,新建实时定量PCR与传统巢式PCR的结果总符合率为89.6%,Kappa系数为0.790。实时定量PCR方法与市售试剂盒检测结果的相关系数R=0.923,P(0.001;两种方法的总符合率为89.6%,Kappa系数为0.792。实时定量PCR与培养法的结果总符合率为83.5%,Kappa系数为0.678。结论采用实时定量PCR方法检测肺炎支原体与其它几种方法相比,快速经济,且污染少,特异性强,灵敏度高,具有很重要的科研和临床实用价值。