目的建立SYBR-Green染料法实时定量聚合酶链反应（PCR）检测流感嗜血杆菌（Hi）感染的实验室诊断方法。方法设计合成针对Hi fucK基因的引物;扩增Hi fucK基因,构建质粒,10倍梯度稀释后,以10108 copy/反应作为标准品绘制标准曲线,并检验新建实验室诊断方法的敏感度;采用实验室保存的肺炎支原体标准株、人型支原体标准株、阴沟肠杆菌标准株、金黄色葡萄球菌标准株、肺炎克雷伯菌标准株和大肠埃希菌标准株的DNA标本,检验新建实验室诊断方法的特异度;将新建立的实验室诊断方法,应用于临床标本的检验。结果新建实验室诊断方法敏感度较高,其可检测到拷贝数为10copy的Hi DNA;具有较高特异度,可成功区别于几种病原体DNA;将该方法应用于226份临床咽拭子标本的检测,检出Hi感染92份,阳性率为40.70%。结论该研究建立的实时定量PCR检测Hi感染的方法,具有较高的敏感度和特异度,操作简单,用时较短,可用于临床Hi感染的实验室诊断。