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◇ 统计源期刊
文章类型：
单位：
[1]首都医科大学附属北京友谊医院,北京热带医学研究所,热带病防治研究北京市重点实验室,北京100050
医技科室
北京热带医学研究所
北京热带医学研究所
首都医科大学附属北京友谊医院
出处：
ISSN：
关键词：
恶性疟原虫
自噬相关蛋白8
原核表达
多克隆抗体
摘要：
目的通过pET-41 Ek/LIC载体在大肠杆菌工程菌中重组表达恶性疟原虫自噬相关蛋白8（PfAtg8）基因的重组蛋白GST-PfAtg8-6×His,并用蛋白免疫法制备小鼠抗自噬相关蛋白8（PfAtg8）的多克隆抗体,并验证其效价。方法体外培养恶性疟原虫3D7株,并提取DNA,PCR扩增PfAtg8序列全长,与pET-41 Ek/LIC载体通过基因重组直接连接,在大肠杆菌RosettaTM（DE3）PLysS工程菌中诱导表达重组蛋白GST-PfAtg8-6×His,蛋白免疫法制备鼠抗PfAtg8的多克隆抗体并用Western blots和酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）进行效价验证。结果 PCR扩增PfAtg8基因并插入pET-41 Ek/LIC载体,转化入大肠杆菌。诱导表达并纯化重组蛋白,进而利用该蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,经验证该抗体可对重组蛋白进行特异性识别,且效价可达1∶100 000。结论成功表达、纯化了GST-PfAtg8-6×His重组蛋白,并免疫小鼠获得多克隆抗体血清。
基金：
国家自然基金青年基金（No.81402539）；;北京市自然科学基金（No.7182023）；;北京市卫生系统高层次卫生技术人才培养计划（No.2015-3-010）；;北京市重点实验室开放课题项目（No.2017-3-3）；
第一作者：
第一作者单位：
[1]首都医科大学附属北京友谊医院,北京热带医学研究所,热带病防治研究北京市重点实验室,北京100050
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
李缜,邹洋,黄敏君,等.恶性疟原虫自噬相关蛋白8基因原核重组表达及多克隆抗体制备[J].中国热带医学.2019,19(5):411-415+429.
